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A levedura metilotrófica Pichia pastoris tem sido utilizada com sucesso para a expressÆo de várias proteínas heterólogas sendo que diversos vetores já foram desenvolvidos para este sistema. Os principais vetores de expressÆo de P. pastoris sÆo baseados no promotor do gene AOX1 que codifica a enzima álcool oxidase 1. Alguns estudos têm sido realizados para o uso de promotores alternativos. Em nosso laboratório foi isolado e caracterizado o promotor do gene PGK1 de P. pastoris (PPGK1), um promotor forte e constitutivo, que representa uma alternativa promissora para a constru‡Æo de novos vetores. O objetivo deste estudo foi determinar a regiÆo promotora mínima do PPGK1 por meio de dele‡äes controladas utilizando o gene da -amilase de Bacillus subtilis como gene repórter. Quatro dele‡äes foram obtidas sendo que a menor (PPGK 3), com ~400 pb, manteve atividade promotora. Foi demonstrado que esta seqüência é capaz de dirigir a integra‡Æo de um vetor no genoma de P. pastoris e 51% dos clones transformantes tiveram mais de uma cópia integrada. O uso deste promotor propiciou a expressÆo heteróloga de -amilase em altos níveis (250 U.mL-1).

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Andrelisse Arruda-Bióloga(2003), Mestre em Biologia Molecular-UNB(2008).Doutorado em Biodiversidade e Biotecnologia-PPG-BIONORTE(2013-2017).Fernando A.Torres-Biólogo(1985), Mestre em Biologia Molecular-UNB(1989), Doutor em Molecular Cellular and Developmental Biology-Indiana University,EUA(1995). Professor associado 4 da Universidade de Brasília.

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